产品描述

质量评估

本试剂盒相关产品已通过外观、pH、浊度、渗透压、无菌、内毒素等试验。

使用方法

方案一

12×106 cells/mL（需离心细胞）转染

*注：所提供对照抗体表达质粒已经按1:1比例预混了HC质粒和LC质粒,可直接使用。

客户自己的项目可以根据自己的需求在总量不变的前提下来调整质粒比例和用量。

如摇床振幅小于50 mm，则需要适当调高转速。建议培养体积为摇瓶总体积的15%-20%。

NovoCHOTRANS™Pro瞬转试剂盒

产品简介

NovoCHOTRANS™Pro瞬转表达体系包含NovoCHO™Basal基础培养基、NovoCHO™Feed补料培养基、NovoCHO™Enhancer表达增强剂，NovoCHO™Trans转染试剂和NovoCHO™Booster转染促进剂5种成分。NovoCHO™Basal基础培养基和NovoCHO™Feed补料培养基均为化学成分确定培养基 (无蛋白、无生长因子、无动物源成分)，适用于CHO-K1、CHO-S、ExpiCHO-S等CHO细胞系的高密度培养以及重组蛋白的高水平瞬转表达，结合NovoCHO™Trans转染试剂，可完成高效率转染，7天可实现克级表达量。高密度转染方案 (12×10⁶ cells/mL，需离心细胞) 7天表达量可达2-4 g/L，常规转染方案 (10×10⁶ cells/mL，无需离心细胞) 7天表达量可达1-2 g/L。

*注：上述表达量数据基于诺佰佰CHO-K1细胞测试所得结果。若客户使用其他CHO细胞株，产率可能与上述结果存在差异。如需获取诺佰佰CHO-K1细胞，请联系BD团队。

方案二

10×106”cells/mL (无需离心细胞) 转染

*注：所提供对照抗体表达质粒已经按1:1比例预混了HC质粒和LC质粒,可直接使用。

客户自己的项目可以根据自己的需求在总量不变的前提下来调整质粒比例和用量。

如摇床振幅小于50 mm，则需要适当调高转速。建议培养体积为摇瓶总体积的15%-20%。

01细胞驯化

直接适应法：

1、 将无血清培养基中培养的细胞直接接种到NovoCHOTMBasal培养基中，接种密度为0.3-0.5×106 cells/mL，培养条件：37℃、120 rpm (50 mm振幅)、5% CO2，125 mL摇瓶，培养体积20-30 mL (可根据已有工艺或培养方法适当调整)。

2、 每3天持续传代细胞，直到细胞稳定生长，如果细胞倍增时间不大于对照培养基则认为细胞已适应到新培养基。

梯度适应法：

1、 对于部分不能直接适应NovoCHOTMBasal培养基的细胞株，需要通过渐进式适应法驯化。梯度驯化实验中，新旧培养基的比例可以适当调整。

2、 待细胞在原始培养基中细胞密度达到≥2×106 cells/mL，活率≥90%，可开始进行NovoCHOTMBasal培养基的适应性培养，按下表进行培养基比例的更换。在某一比例培养时，需要确认细胞在这一比例的培养基中生长良好，再进一步稀释培养。

NovoCHOTMBasal 原始培养基 (%) 细胞接种密度 (×106cells/mL) 细胞生长评估 进行下一步前的标准 VCD (×106 cells/mL) VIA (%) 25:75 0.3-0.5 VCD&VIA ≥2 ≥90 50:50 0.3-0.5 ≥2 ≥90 75:25 0.3-0.5 ≥2 ≥90 100:0 0.3-0.5 ≥2 ≥90

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*注：可根据细胞适应难易程度，适当跳过某些比例或增加某些比例。

3、 在完全使用NovoCHOTMBasal培养基接种3天之后，活细胞计数应该至少达到2×106 cells/mL，细胞活性≥90%。此时，细胞已经驯化到NovoCHOTMBasal培养基中。

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1、 按传代最终体积 (根据项目所需)，接种密度为0.3×106 cells/mL，计算所需细胞种子量和所需的新鲜培养基量。

2、 在生物安全柜中取所需量细胞种子，转移至含37℃预热NovoCHOTMBasal培养基的摇瓶中。

3、 将摇瓶放入摇床中培养，培养条件：37℃、120 rpm (50 mm振幅)、5% CO2。

4、 根据细胞生长情况，每3天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。

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02细胞传代

1、 准备处于指数生长中期，细胞活率≥90%，状态良好的细胞进行冻存。

2、 测定活细胞密度，计算冻存所需的种子量 (建议冻存密度：1-2×107 cells/mL)。

3、 准备细胞冻存液，90%的NovoCHOTMBasal基础培养基，加入10%的DMSO (现用现配，配制好后放冰箱冷藏待用)。

4、 将准备好的细胞种子液离心处理，转速200 g，时间5min。

5、 在生物安全柜中，将离心之后的上清液倒掉，用准备好的冻存液重悬细胞，再分装在冻存管中。

6、 用程序降温冻存盒保存冻存管，放置于-80°C冰箱，过夜后，及时放入液氮保存。

03细胞冻存

1、提前打开水浴锅，并设置温度至37.0℃。

2、将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中解冻 (<3min)。

3、将冷冻管中的细胞液全部转移到含有30 mL已预热NovoCHOTMBasal基础培养基的125 mL摇瓶中。

4、将摇瓶置于摇床中培养，培养条件：37℃、120 rpm (50mm振幅)、5% CO2。

5、细胞至少传代2次，待细胞完全复苏且活率在90%以上，可按计划进行后续操作。

04细胞复苏

常见Q&A

1. 能否用其他组分替代本试剂盒中组分进行CHO转染实验？

不建议使用其他产品替代本试剂盒中任一组分，因其可能无法支持同等活细胞密度，且可能含抑制CHO转染的成分。

2. 此产品适合什么CHO细胞系？

适用于CHO-K1、CHO-S、ExpiCHO-S等各种CHO细胞。