产品介绍

Novo293 TRANS瞬转表达体系包含Novo293 Basal基础培养基，Novo293 Feed补料培养基，Novo293 Enhancer表达增强剂和Novo293 Trans转染试剂4种成分。Novo293 Basal基础培养基和Novo293 Feed补料培养基均为化学成分确定培养基 (无蛋白、无生长因子、无动物源成分)，适用于HEK293F等293细胞系的高密度培养以及重组蛋白的高水平瞬转表达。结合Novo293TMTrans转染试剂，可完成高效率转染，7天可实现克级表达量。

产品信息

质量评估

本试剂盒相关产品已通过外观、pH、浊度、渗透压、无菌、内毒素等试验。

使用方法

附：1. 细胞驯化

• 直接适应法：

1. 将无血清培养基中培养的细胞直接接种到Novo29 3Basal培养基中，接种密度为0.3-0.5×10^6 cells/mL，培养条件：37°C、120 rpm (50 mm振幅)、5-8% CO2，125 mL摇瓶，培养体积20-30 mL (可根据已有工艺或培养方法适当调整)。
2. 每3天持续传代细胞，直到细胞稳定生长，如果细胞倍增时间不大于对照培养基则认为细胞已适应到新培养基。

• 梯度适应法：

1. 对于部分不能直接适应Novo293 Basal培养基的细胞株，需要通过渐进式适应法驯化。梯度驯化实验中，新旧培养基的比例可以适当调整。
2. 待细胞在原始培养基中细胞密度达到≥2×10^6 cells/mL，活率≥90%，可开始进行Novo293TMBasal培养基的适应性培养，按下表进行培养基比例的更换。在某一比例培养时，需要确认细胞在这一比例的培养基中生长良好，再进一步稀释培养。

*注：可根据细胞适应难易程度，适当跳过某些比例或增加某些比例。

3. 在完全使用Novo293 Basal培养基接种3天之后，活细胞计数应该至少达到2×10^6 cells/mL，细胞活性≥90%。此时，细胞已经驯化到Novo293 Basal培养基中。

2. 细胞传代

1. 按传代最终体积 (根据项目所需)，接种密度为0.3-0.5×106 cells/mL，计算所需细胞种子量和所需的新鲜培养基量。
2. 在生物安全柜中取所需量细胞种子，转移至含37°C预热Novo293 Basal培养基的摇瓶中。
3. 将摇瓶放入摇床中培养，培养条件：37°C、120 rpm (50 mm振幅)、5-8% CO2。
4. 根据细胞生长情况，每3天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。

3. 细胞冻存

1. 准备处于指数生长中期，细胞活率≥90%，状态良好的细胞进行冻存。
2. 测定活细胞密度，计算冻存所需的种子量 (建议冻存密度：1-2×10^7 cells/mL)。
3. 准备细胞冻存液，90%的Novo293 Basal基础培养基，加入10%的DMSO (现用现配，配制好后放冰箱冷藏待用)。
4. 将准备好的细胞种子液离心处理，转速200 g，时间5 min。
5. 在生物安全柜中，将离心之后的上清液倒掉，用准备好的冻存液重悬细胞，再分装在冻存管中。
6. 用程序降温冻存盒保存冻存管，放置于-80°C冰箱，过夜后，及时放入液氮保存。

4. 细胞复苏

1、提前打开水浴锅，并设置温度至37°C。

2、将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中解冻 (<3 min)。

3、将冷冻管中的细胞液全部转移到含有30 mL 已预热Novo293 Basal基础培养基的125 mL摇瓶中。

4、将摇瓶置于摇床中培养，培养条件：37°C、120 rpm (50 mm振幅)、5-8% CO2。

5、细胞至少传代2次，待细胞完全复苏且活率在90%以上，可按计划进行后续操作。

常见Q & A

1. Novo293 TRANS表达系统中，培养瓶的最大培养体积是多少？

具体取决于培养瓶规格，但通用经验法则是使用培养瓶容积的四分之一。可参考说明书推荐的规格。

2. Novo293 TRANS表达系统中，摇瓶速度可以高于或低于推荐值吗？

说明书中提供了适配培养容器的最佳摇速。对于多数培养瓶，过快或过慢的摇速会因细胞剪切应力或通气不足导致表达量下降。在培养板中此效应更显著，因孔内液体动静状态切换更剧烈。